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基因的PCR扩增和DNA熔解分析
点击次数:1315 发布时间:2017-04-06

      TaqMan探针作为阻断剂参与突变基因的PCR扩增和DNA熔解分析

TaqMan探针的非对称PCR以及DNA熔解分析被应用于突变检测,可有效用于临床诊断。该方法简单、成本低,在一个封闭的离心管中进行,可zui大限度的减少反应时间,减轻工作量,以及避免样品间的交叉污染。尽管DNA熔解分析比DNA常规测序更加灵敏(两者的突变检测阈值分别为5%15%20%),但相比与那些工作量大且昂贵的生物技术,如焦磷酸测序和微滴型数字PCR而言,其灵敏度相差甚远。Irina V. Botezatu等科学家证明,在一些特殊的非对称PCR情况下,TaqMan探针可作为阻断剂,能够优先阻断野生型等位基因的扩增,从而导致突变型等位基因的大量扩增。因此,使得BRAFNRAS突变基因的检测灵敏度增加了10倍。

原文:

Irina V. Botezatu, Irina O. Panchuk, Anna M. Stroganova, et al. TaqMan probes as blocking agents for enriched PCR amplification and DNA melting analysis of mutant genes. BioTechniques 62:62-68 (February 2017).

 

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