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适用于不同反应体积的重组酶聚合酶等温扩增技术
点击次数:2519 发布时间:2017-07-17

采用PCR或等温扩增的方法来扩增DNA(或RNA)时,反应温度在50℃以上,反应体积介于10-100 ul之间,并且可能需要在样品上覆盖一层油性物质或采取相似的封闭操作。这是因为,在反应的过程中伴随的蒸发现象致使反应体积不可过小,另一方面,较大的反应体积会消耗更多的耗材,并且在循环扩增过程中无法有效的进行温度控制(达到预定的温度需要较长的时间)。TwistDx’s提出的重组酶聚合酶扩增(RPA)技术对这一难题给出了解决方案。重组酶聚合酶扩增反应可在低温(通常在37-42℃,可以在更低温度下进行)下进行,反应迅速,用时短(通常在3-15 min完成反应),即便不在反应体系上覆盖油层或采取其它的密封措施仍可大大降低蒸发造成的影响。低温运行,可有效防止背景噪声,使结果更,即便需要更长的时间达到*反应温度也不会影响实验结果。因此,RPA技术的优点在于,既可用于微体积反应(数字方法),也可用于大体积反应体系,例如具有简单生物样本的低复杂性分子检测。文中展示了RPA技术用于不同体积反应体系的实验结果,反应在标准的PCR管(0.2 ml)中进行,各反应体系均未采取油密封或其它密封操作。

 

原文:

Recombinase Polymerase Amplification (RPA) an isothermal technique suitable for a range of applications- Evaluation of RPA volume tolerance. BioTechniques 62:190 (April 2017).

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