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描述核酸染料使用方法
点击次数:1092 发布时间:2018-12-08
   描述核酸染料使用方法
  核酸染料采用琼脂糖电泳检测DNA时,GoldView II与核酸结合后能产生很强的荧光信号,其灵敏度比EB强5-10倍,使用方法与之完全相同。GoldView II与核酸结合后,大吸收峰为497nm,另外,其在254nm处也有一强吸收峰,发射波长为520nm,在紫外透射光下双链DNA呈现绿色荧光,而且也可用于染RNA。
  通过Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠睾丸精母细胞染色体畸变试验,致突变性结果均为阴性;而溴化乙锭(EB)是一种强致癌剂。因此用Goldview II代替EB不失为一种明智的选择。
  核酸染料为DMSO溶解,低温时为固体状态,温度到达20℃以上即可融化。
  核酸染料使用方法:
  由于GoldView II敏感度比EB高数倍,使用时,请将商品化的Marker用1×DNA Loading Buffer作5-10倍的稀释,上样1-10µl,以得到较好的结果(通常稀释10倍后上样5ul)。对于待检测样品,通常仅需1-2µl即可。如果浓度较高,也须作一定倍数稀释,否则会造成条带不整,影响迁移速率。凝胶回收请选择点染方法。
  1.将50ml琼脂糖凝胶溶液(浓度一般为0.8%~2%)在微波炉中融化。
  2.冷却至不烫手时加入10-15µl GoldView II(不能少于10ul),轻轻摇匀,避免产生气泡。
  3.倒胶,待琼脂糖凝胶完全凝固后上样电泳。
  4.电泳完毕在紫外灯下观察。若使用数码相机照像记录,则关闭相机的闪光灯,放在自动档即可;若使用凝胶成像系统照相,通过调节光圈、曝光时间,选择合适的滤光片,可得到成像清晰的照片。
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