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酶联免疫吸附法
点击次数:269 发布时间:2021-08-04

 原理:可用于测定抗体,也可用于检测杭原。其基本原理是采用抗原与抗体的特异反响将待测物与酶连接,然后通过酶与底物发生颜色反响,用于定量测定。酶联免疫吸附法测定的对象可所以抗体也可所以抗原。3种必要的试剂: 

固相的抗原或抗体(免疫吸附剂); 

酶符号的抗原或抗体(符号物); 
酶效果的底物(显色剂)。

ELISA进程包括:抗原吸附在固相载体上,这个进程称为包被,加待测抗体, 再加相应酶符号抗体,生成抗原--待测抗体--酶符号抗体的复合物,再与该酶的底物反响生成有色产品。借助分光光度计的光吸收核算抗体的量。

依据检测意图和操作过程不同,有以下三种类型的常用办法:

a、间接法  

此法是测定抗体zui常用的办法。将已知抗原吸附于固相载体。加人待检标本(含相应抗体)与之结合。洗刷后,加人酶标抗球蛋白抗体(酶标抗抗体)和底物进行测定。

b、双抗体夹心法  

酶联免疫吸附法此法常用于测定抗原。将已知抗体吸附于固相载体,加人待检标本(含相应抗原)与之结合。温育后洗刷,加人酶标板中。

c、竞争法  

此法可用于抗原和半抗原的定量测定,也可用于测定抗体。以测定抗原为例,将特异性抗体吸附于固相载体。参加待测抗原和一定量的酶标已知抗原,使二者竟争与固相抗体结合;通过洗刷分离,zui后结合于固相的酶标抗原与待测抗原含量呈负相关。

 

 


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