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SMOBIO蛋白marker FA Q简介
点击次数:3319 更新时间:2023-01-06

SMOBIO蛋白marker FA Q

Q,如何选择适合的产品?

SMOBIO 蛋白marker 分子量范围广、条带清晰锐利

 

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PM2510符合大多数使用者需求

小分子选PM2700

大分子选PM2800

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Q,为何大分子条带会消失不见

跑胶缓冲液遭受蛋白酶(proteinase) 污染,buffer reuse 太多次,导致长菌以致于有proteinase 存在,或是上样时反复使用同一支 tip

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                                           受到污染后蛋白会从大分子开始降解

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解决办法:

1.  上样时使用避免反复使用同一支Tip

2.  内槽使用新鲜配置的跑胶缓冲液。

 

 

Q,为何转膜后条带会歪斜或消失不见?

胶体与膜之间未紧贴,胶体与膜之间仍有缓冲液

模拟试验: 转膜装置未紧贴

 

解决办法:

1.   增加filter paper 张数(或厚度)à上下各三张

2.   使用滚轮胶体与膜之间气泡或缓冲液赶走

3.   更换新的海绵垫

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Q,为何转膜后高分子條帶消失?

1. >100KDa高分子量蛋白会需要比较长的转膜时间及较高的电压

2. 缓冲液重复使用太多次或组成不正确,建议使用新鲜配制的缓冲液

3. 转膜液体可添加0.010.1SDS以促进高分子量蛋白质的转移

 

在正确转膜条件下,10-310kDa在转膜后都是清晰可见的状态

 


 

Q,为何小分子条带 (<5kDa) 会跑不出来?

条带在不同缓冲溶液系统、不同浓度会有不一样的分布 (如下图)

须根据需求来选择胶的浓度或挑选适合的缓冲溶液系统

<10kDa分子分不开,建议使用MES buffer

>100kDa分子分不开,建议使用MOPS buffer

 

 

 

Q,为何洗膜后条带会变弱或不见

1. 洗膜液体中的Tween20浓度过高 (建议使用0.05%~1%)

2. 洗膜转速过高(建议使用25~50 rpm)

经过测试:

T(箭头)模糊甚至10kDa消失不见。

SMOBIO洗完后,条带依然清晰锐利。

但过高浓度的Tween 20会造成整体条带颜色变浅