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血清知多少
点击次数:863 更新时间:2023-05-16

血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物,其组成成份虽大部分已知,但是由于血清成分十分复杂,直至今天,血清中的所有成分仍未wan全分析出来,且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而发生改变。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等,这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。

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牛血清的区别

牛血清是细胞培养中重要的天然培养基,含有丰富的细胞生长必须的营养成份,常用于动物细胞的体外培养。可以划分为:胎牛血清、新生牛血清、小牛血清、成牛血清。

胎牛血清(Foetal Bovine Serum,简称FBS:胎牛血清是指怀孕3-8个月的母牛被屠宰后,发育未wan全的胎牛心脏密闭穿刺采血后,通过一系列工艺处理最终获得。此时胎牛血中含有特殊的生长发育因子,一旦胚胎发育wan全这些因子会自动消失。


新生牛血清(Newborn Calf Serum,简称NBCS:出生14小时内未进食的新生牛,通常采用颈动脉采集血液分离得到的血清。

小牛血清(Calf serum, CS)取自出生后3天至6个月的健康小牛,动脉采血分离血清;

成牛血清Adult Bovine Serum,简称ABS:取自健康的成年牛,收全血后分离得到血清

胎牛血清是品质相对较高的,因为胎牛还未接触外界,血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。

某些细胞必需胎牛血清才能生长,而有些细胞只需小牛血清即可。使用浓度一般在5%-10%,有特殊要求的浓度在20%

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牛血清的保存

未拆封的牛血清,一般情况下应存放于-10℃至-20℃,在产品规定的效期内均可使用,若一次无法用完一瓶,建议无菌分装血清至合适大小的无菌离心管内,再放回冷冻。

牛血清在放入冷冻环境前,建议瓶中预留一定的体积空间,避免血清冻结后体积增大,撑破包装瓶,形成污染。

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牛血清的使用

血清从冷冻冰箱取出后,先置于28℃冰箱使之融解,然后在室温下使之全融,或通过水浴锅促使其溶解。但必须注意的是,融解过程中必须规则地摇晃均匀。wan全溶解后建议尽快使用,若长时间储存在2-8℃,血清中的各种(脂)蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能因凝集而形成沉淀或可见的混浊。

牛血清的沉淀处理

血清中沉淀物的出现有许多种原因,但普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成,而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解冻后,也会存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但这些絮状沉淀物,并不影响血清本身的质量。若欲去除这些絮状沉淀物,可以将血清分装至无菌离心管内,以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物,因为它可能会阻塞您的过滤膜。

解冻血清时,请按照所建议的逐步解冻法(-20℃至4℃至室温),若血清解冻时改变的温度太大(-20℃至37),实验显示非常容易产生沉淀物。解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清会变得混浊,同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害,而影响血清的质量。血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。

血清中的黑胶虫"

在细胞培养的时候,有时会在400倍显微镜下看到小黑点在动,小黑点有时呈点状,有时呈小的片状,运动形式为在原地振动,类似布朗运动,这种小黑点既不是细菌、霉菌,也不是支原体,目前业内人士称其为黑胶虫"

黑胶虫究竟是一种生物还是非生物,本身就存在争议。黑胶虫一般是存在血清里的,而血清通常是经过0.1μm滤膜过滤的,所以血清里不可能存在细菌、霉菌及支原体等微生物。如果说黑胶虫不是生物,它会不断增多,达到一定数量时会与细胞竞争性生长,与细胞竞争培养基中的营养,从而使得细胞营养不足而死亡。

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