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4种核酸染料的比较
点击次数:1769 发布时间:2017-08-23
   4种核酸染料的比较
  1、EB(溴化乙锭)
  溴化乙锭是一种高度灵敏的嵌入性荧光染色剂,为强致癌诱变剂,但价格便宜。它与DNA的结合几乎没有碱基序列特异性。在高离子强度的饱和溶液中,大约每2.5个碱基插入一个溴化乙锭分子。EB的这种特性使其成为一种核酸染料,常用于琼脂糖凝胶电泳中的核酸染色。溴化乙锭在紫外区302nm和366nm处有吸收峰,在紫外光的照射下,溴化乙锭可被激发出橙红色的荧光(590nm)。结合有DNA的溴化乙锭复合物的荧光强度要比没有合DNA的染料高出20-30倍,因此溴化乙锭可检测到少至10ng的DNA条带,非常灵敏。
  2、Gel Green和Gel Red
  由Biotium公司研发推出的EB替代染料,染色效果和EB差不多,在紫外下不容易淬灭,可以用于胶回收。但价格较贵。
  GelRed和GelGreen是两种集高灵敏、低毒性和超稳定性于一身的的荧光核酸凝胶染色试剂。其水溶染色剂通过美国环保局安全认定,废弃物可直接倒入下水道,而不会造成任何环境污染。其特点有:
  1)高灵敏度:GelRed和GelGreen是目前市场中zui灵敏的凝胶核酸染料之一;
  2)稳定性极好:可以使用微波炉加热,可以在室温下保存;
  3)更安全:艾姆斯氏试验结果表明,该染料的诱变性远小于溴化乙锭(EB);
  4)广泛的适应性:适用于预制凝胶和凝胶电泳后染色;
  5)染色过程简单:与EB一样,在预制胶和电泳过程中不必担心染料降解;而电泳后染色过程也只需30分钟且无需脱色或冲洗;
  6)对DNA和RNA的迁移影响小:对核酸迁移的影响小于SYBR Green I?;
  7)与标准凝胶成像系统以及可见光激发的凝胶观察装置兼容:使用312nm激发的UV凝胶成像系统时,GelRed可以的替代EB;使用254nm激发的UV凝胶成像系统或可见光激发的凝胶观察装置时,GelGreen足以替代任意一种SYB染料。但该染料会使小片段DNA迁移慢一些(与EB相比).
  3、Gold View I型/II型
  Goldview对于大片段DNA的染色效果良好,但是在对于500bp以下的片段效果不是很好,还有一个很致命的弱点是它的荧光基团在紫外灯下非常容易淬灭,一般5-10min条带就会消失。另外Goldview不适用于胶回收。Goldview其实就是AO(丫啶橙,一种剧毒产品)且荧光效果远不如EB,灵敏度差,本底色严重,不利用于回收,不稳定,在紫外灯下其诱导突变能力极高
  4、SYBR Green和SYBR Gold
  稳定性差,也有毒性。它属于花箐素类核酸染料,花箐类染料不是无毒的,而只是低毒的,电泳级别的是经过修饰的,修饰有三种:1.加入卤素或*基。2.插入环羟基。3.加入稳定剂。SYBR Green I是高灵敏的DNA荧光染料,适用于各种电泳分析,操作简单:无须脱色或冲洗。至少可检出20pg DNA,高于EB染色法25-100倍。SYBR Green I与dsDNA结合荧光信号会增强800-1000倍,用SYBR Green I染色的凝胶样品荧光信号强,背景信号低。SYBR Green和SYBR Gold相对于EB的稳定性要差很多。SYBR系列的染料也能进入细胞染色线粒体以及核内的DNA,从而产生危害。SYBR Green I已被证实在紫外光下将会产生强诱变能力,使DNA或其他物质发生突变。
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