荧光定量服务


荧光定量PCR的基本原理就是在PCR扩增过程中，随着PCR循环数的递增，PCR产物不断积累，荧光信号也会相应的增加，这样就可以通过荧光强度的变化来对PCR反应进行实时的监测，并以b-Actin或GAPDH等管架基因作为内参照，对目的基因的表达量进行半定量检测。

科佰生物将根据您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探针法。通过对DNA或RNA的荧光定量PCR监测, 实现基因的相对定量、定量和定性分析。

SYBR Green荧光染料法：适用于任何DNA，无需设计探针，采取双标准曲线法，实验周期短，结果重复性好，灵敏度高。

TaqMan荧光探针法：经验丰富的实验技术人员设计探针，对目标基因有高特异性，实验重复性好，相对于SYBR Green法，灵敏度更高。

1.定量：

定量首先必须构建与检测样品目的基因具有相同序列的标准品。使用已知浓度的标准品制作3个点以上的标准曲线后，可以使用标准曲线对未知浓度的检测样品进行量（起始拷贝数）分析。

2.相对定量（mRNA表达量分析）：

基因表达的研究一般采用相对定量的方法。相对定量法必须对样品的目的基因和参比基因内标同时分别进行定量，然后求出对于参比基因的目的基因的相对量。通过对样品间的目的基因的相对量进行比较，可以对不同样品间的mRNA进行表达量分析。参比基因通常选用表达量相对恒定的House Keeping Gene，如：GAPDH、b-actin等。通过同时对参比基因的实时检测，可以对样品之间由于起始细胞数不同、或RNA提取效率的不同等造成的RNA量误差进行校正，达到在严格意义上对样品之间的mRNA表达量进行分析之目的。

1、总 RNA 提取及定量；

2、PCR 引物设计及反转录；

3、荧光引物设计（SYBR Green 荧光染料法）/探针设计（TaqMan 荧光探针法)；

4、荧光定量PCR，进行扩增曲线、溶解曲线、表达量差异分析等实验；

5、数据分析与处理；

6、完整实验报告。

样品要求：

1.样品可提供组织、细胞、RNA、cDNA中的一种,对于提供样本的大致原则如下：组织样本,尽可能提供2×2×2mm3体积或以上,新鲜组织可直接提供，不需处理；对于细胞样本，尽可能提供3×10^6个细胞左右,加适量Trizol处理即可，确保样品适于RNA抽提。RNA、cDNA含量根据同等细胞数量的细胞抽提和逆转录大致界定, 如果提供RNA或cDNA我们要对您提供的材料进行评估。

2.客户提供尽可能详细的背景信息；物种信息，扩增目的基因的NCBI登录号等。

3.运输要求，液氮或干冰保存寄送。

注：样本应避免各类污染和反复冻融。

提交的产品和资料：

1.RNA浓度及荧光定量PCR原始数据及分析结果；

2.荧光定量PCR完整的实验步骤、使用仪器、软件设置参数等。