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鼎国自产 动物组织 DNA 提取试剂盒

简要描述:

本试剂盒采用自主研发的独特裂解液和酶相结合的方法裂解材料,具有效率高、性能稳定、重复性高、速度快等特点。材料被裂解并、经蛋白酶K消化后,DNA在高盐低pH的条件下,与硅基质膜特异性结合,在低盐高pH值条件下,吸附的DNA被洗脱下来。本试剂盒适用于各种动物组织、动物细胞和血液基因组DNA的提取。提取的基因组DNA可以直接用作PCR模板、酶切、杂交等分子生物学实验。

更新时间:2017-06-02

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鼎国自产 动物组织 / 细胞 / 血液基因组 DNA 提取试剂盒 ;350元 

纯化效果检测

取2-5μl得到的DNA产物,0.7%agarose电泳检测DNA分子的完整性和紫外分光光度计检测浓度和纯度。
DNA在260nm处有吸收峰,检测时应该使OD260值在0.1到1.0之间数值较准确。
OD260为1时大概相当于50μg/ml双链DNA,40μg/ml单链DNA。
核酸浓度(μg/ml)=OD260×50×稀释倍数。
OD260/OD280的值应该为1.7~2.0。
常见问题分析:

 常见问题可能原因建议
柱子堵塞裂解消化不充分适当延长Proteinase K消化时间。
样品过多样品量不要超过说明书所定zui大量;可适当增加Proteinase K的用量
DNA产量低将沉淀倒入柱子导致柱子堵塞加大转速和延长离心时间
Wash buffer A、Wash buffer B没有加无水乙醇按说明书加入无水乙醇
洗脱效率低洗脱液使用前于55-65℃预热;洗脱液pH值不合适,应保证在7.5~8.5
样品裂解不完全适当延长裂解时间。
样品不够新鲜尽量使用新鲜样品
DNA纯度低消化不完全样品量不要超过规定范围;延长消化时间,使样品充分消化
洗涤不当严格按照说明书步骤洗脱
乙醇未除干净适当延长晾干时间,使乙醇充分挥发

产品简介:
本试剂盒采用自主研发的独特裂解液和酶相结合的方法裂解材料,具有效率高、性能稳定、
重复性高、速度快等特点。材料被裂解并、经蛋白酶K消化后,DNA在高盐低pH的条件下,
与硅基质膜特异性结合,在低盐高pH值条件下,吸附的DNA被洗脱下来。
本试剂盒适用于各种动物组织、动物细胞和血液基因组DNA的提取。
提取的基因组DNA可以直接用作PCR模板、酶切、杂交等分子生物学实验。
组成:
 

成分50注意事项
RNase A0.5 ml-20℃保存
Proteinase K0.5 ml-20℃保存
Lysis Buffer A35 ml室温低时可能有白色沉淀产生,加热溶解即可
Lysis Buffer B25 ml 
Wash buffer A27 ml用前加入18 ml 无水乙醇,充分混匀
Wash buffer B16 ml用前加入64 ml无水乙醇,充分混匀
Elution Buffer10 ml 
离心柱50个单个zui大吸附量20 μg
红细胞裂解液50ml4℃


 

 

 

 

 

 

 

 

可选试剂

编号品名规格价格
NEP033红细胞裂解液100ml40.00


 实验前试剂准备

 Wash buffer A中加入18 ml 无水乙醇,充分混匀。
 Wash buffer B中加入64 ml无水乙醇,充分混匀。
 储存条件:  请按照上表中注意事项的条件保存,其他未说明的可常温或4度保存。
 步骤:
 1、样品处理
 全血:取50-300 μl全血,加入3倍体积的红细胞裂解液,震荡混匀,12000rpm离心1min,
 去上清。加入600 μl Lysis Buffer A,震荡混匀。
 禽血:加入10-100 μl禽血,直接加入600 μl Lysis Buffer A,颠倒混匀。
 动物组织:取20-50mg动物组织,液氮研磨或匀浆,加入100 μl PBS重悬样品,
 然后加入到准备好的600 μl Lysis Buffer A,振荡混匀。
 动物细胞:离心收集105-106个培养细胞,加入100 μl PBS重悬细胞,
 加入600 μl Lysis Buffer A,震荡混匀。
 2、 加入10 μl Proteinase K,60 ℃水浴20 min~40 min,其间颠倒混匀数次。
 如需消化RNA,可待样品裂解完全后加入10 μl RNase A,混匀,室温放置10 min
  若加入样品较多,可适当延长水浴时间,适量增加Proteinase K的量,按比例增加
  
Lysis Buffer ALysis Buffer B量。

 3、 加入400 μl Lysis Buffer B,漩涡震荡30 s。
 4、 12,000 rpm离心5 min,将上清转入离心柱中,静置2 min。

上清可能出现少量白色漂浮物,此为未消化完全的细胞和蛋白质。

 5、 12,000 rpm离心1 min,弃废液。
 6、 加入700 μl Wash buffer A(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm离心  1min,弃废液。
 7、 加入700 μl Wash buffer B(使用前请先检查是否已加入无水乙醇), 12,000 rpm离  心  1min,弃废液。
 8、 加入500 μl Wash buffer B,12,000 rpm离心1 min,弃废液。
 9、 再次12,000 rpm离心2 min,将离心柱置于新的离心管中,并打开离心柱盖,于室温或37 ℃恒  温箱放置5~10min,
 直至无明显乙醇味。
 10、在硅基质膜中央加入50~200 μl Elution Buffer或双蒸水(事先预热55~65 ℃),置于室  温2  min,12,000 rpm离2 min。
 所得液体即为基因组DNA溶液。

 

 

 

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