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鼎国自产 动物组织 DNA 提取试剂盒

简要描述:

本试剂盒采用自主研发的*裂解液和酶相结合的方法裂解材料,具有效率高、性能稳定、重复性高、速度快等特点。材料被裂解并、经蛋白酶K消化后,DNA在高盐低pH的条件下,与硅基质膜特异性结合,在低盐高pH值条件下,吸附的DNA被洗脱下来。本试剂盒适用于各种动物组织、动物细胞和血液基因组DNA的提取。提取的基因组DNA可以直接用作PCR模板、酶切、杂交等分子生物学实验。

更新时间:2017-06-02

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鼎国自产 动物组织 / 细胞 / 血液基因组 DNA 提取试剂盒 ;350元 

纯化效果检测

取2-5μl得到的DNA产物,0.7%agarose电泳检测DNA分子的完整性和紫外分光光度计检测浓度和纯度。
DNA在260nm处有吸收峰,检测时应该使OD260值在0.1到1.0之间数值较准确。
OD260为1时大概相当于50μg/ml双链DNA,40μg/ml单链DNA。
核酸浓度(μg/ml)=OD260×50×稀释倍数。
OD260/OD280的值应该为1.7~2.0。
常见问题分析:

 常见问题可能原因建议
柱子堵塞裂解消化不充分适当延长Proteinase K消化时间。
样品过多样品量不要超过说明书所定zui大量;可适当增加Proteinase K的用量
DNA产量低将沉淀倒入柱子导致柱子堵塞加大转速和延长离心时间
Wash buffer A、Wash buffer B没有加无水乙醇按说明书加入无水乙醇
洗脱效率低洗脱液使用前于55-65℃预热;洗脱液pH值不合适,应保证在7.5~8.5
样品裂解不*适当延长裂解时间。
样品不够新鲜尽量使用新鲜样品
DNA纯度低消化不*样品量不要超过规定范围;延长消化时间,使样品充分消化
洗涤不当严格按照说明书步骤洗脱
乙醇未除干净适当延长晾干时间,使乙醇充分挥发

产品简介:
本试剂盒采用自主研发的*裂解液和酶相结合的方法裂解材料,具有效率高、性能稳定、
重复性高、速度快等特点。材料被裂解并、经蛋白酶K消化后,DNA在高盐低pH的条件下,
与硅基质膜特异性结合,在低盐高pH值条件下,吸附的DNA被洗脱下来。
本试剂盒适用于各种动物组织、动物细胞和血液基因组DNA的提取。
提取的基因组DNA可以直接用作PCR模板、酶切、杂交等分子生物学实验。
组成:
 

成分50注意事项
RNase A0.5 ml-20℃保存
Proteinase K0.5 ml-20℃保存
Lysis Buffer A35 ml室温低时可能有白色沉淀产生,加热溶解即可
Lysis Buffer B25 ml 
Wash buffer A27 ml用前加入18 ml 无水乙醇,充分混匀
Wash buffer B16 ml用前加入64 ml无水乙醇,充分混匀
Elution Buffer10 ml 
离心柱50个单个zui大吸附量20 μg
红细胞裂解液50ml4℃


 

 

 

 

 

 

 

 

可选试剂

编号品名规格价格
NEP033红细胞裂解液100ml40.00


 实验前试剂准备

 Wash buffer A中加入18 ml 无水乙醇,充分混匀。
 Wash buffer B中加入64 ml无水乙醇,充分混匀。
 储存条件:  请按照上表中注意事项的条件保存,其他未说明的可常温或4度保存。
 步骤:
 1、样品处理
 全血:取50-300 μl全血,加入3倍体积的红细胞裂解液,震荡混匀,12000rpm离心1min,
 去上清。加入600 μl Lysis Buffer A,震荡混匀。
 禽血:加入10-100 μl禽血,直接加入600 μl Lysis Buffer A,颠倒混匀。
 动物组织:取20-50mg动物组织,液氮研磨或匀浆,加入100 μl PBS重悬样品,
 然后加入到准备好的600 μl Lysis Buffer A,振荡混匀。
 动物细胞:离心收集105-106个培养细胞,加入100 μl PBS重悬细胞,
 加入600 μl Lysis Buffer A,震荡混匀。
 2、 加入10 μl Proteinase K,60 ℃水浴20 min~40 min,其间颠倒混匀数次。
 如需消化RNA,可待样品裂解*后加入10 μl RNase A,混匀,室温放置10 min
  若加入样品较多,可适当延长水浴时间,适量增加Proteinase K的量,按比例增加
  
Lysis Buffer ALysis Buffer B量。

 3、 加入400 μl Lysis Buffer B,漩涡震荡30 s。
 4、 12,000 rpm离心5 min,将上清转入离心柱中,静置2 min。

上清可能出现少量白色漂浮物,此为未消化*的细胞和蛋白质。

 5、 12,000 rpm离心1 min,弃废液。
 6、 加入700 μl Wash buffer A(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000 rpm离心  1min,弃废液。
 7、 加入700 μl Wash buffer B(使用前请先检查是否已加入无水乙醇), 12,000 rpm离  心  1min,弃废液。
 8、 加入500 μl Wash buffer B,12,000 rpm离心1 min,弃废液。
 9、 再次12,000 rpm离心2 min,将离心柱置于新的离心管中,并打开离心柱盖,于室温或37 ℃恒  温箱放置5~10min,
 直至无明显乙醇味。
 10、在硅基质膜中央加入50~200 μl Elution Buffer或双蒸水(事先预热55~65 ℃),置于室  温2  min,12,000 rpm离2 min。
 所得液体即为基因组DNA溶液。

 

 

 

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