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RIPA 组织 / 细胞裂解液(强)

简要描述:

RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。
注意事项 : 1.为获得实验效果,可适当分装使用,以尽量避免反复冻融。 2.PMSF应现用现加。 3.裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。 4.蛋白酶抑制剂均有较高的毒性,为

更新时间:2018-08-01

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RIPA 组织 / 细胞裂解液 规格;50ml 编号;WB-0072  

产品简介:RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。
RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。
RIPA裂解液(强)的主要成分为50mM Tris(pH7.4),150mM NaCl,1%Triton X-100,
1% sodium deoxycholate,0.1%SDS,以及sodium orthovanadate,sodium fluoride,EDTA,
leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白降解。
用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用本公司生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。
由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
包装清单:

RIPA裂解液(强)50ml(-20℃保存)
PMSF(100×)550ul(-20℃保存)
使用说明书1份

 

使用说明:
取出裂解液,待融化后颠倒混匀数次,适量分装冻存。
在使用前取出PMSF(100mM),按比例加入(使其zui终浓度为1mM)混匀,立即使用。
1、培养细胞:
(1)贴壁细胞:去除培养液,用PBS、盐水或无血清培养液洗2-3遍
(如血清中的蛋白没有干扰,也可以不洗)。
按6孔板每孔加入100-200ul的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。
通常裂解液接触细胞数秒后细胞就会被裂解。
(2)悬浮细胞:收集培养细胞,离心去除培养液,用PBS、盐水或无血清培养液洗2-3遍
(如血清中的蛋白没有干扰,也可以不洗),
用手指把细胞用力弹散,按6孔板每孔细胞加入100-200ul的比例加入裂解液。
如果细胞数量较大,应按50-100万细胞/管分装或根据细胞数量按比例增加裂解液。
用手指轻弹管底以促进裂解液和细胞充分接触,裂解完全时应无明显的细胞颗粒。
裂解物经10,000-14,000g离心3-5min,取上清,即可进行后续的PAGE、Western、
免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加入100微升裂解液已经足够,
但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150微升或200微升。
2、组织样品
取Ep管,分别称重标记,把组织剪切成小块装入Ep管中,称重。
按每20mg组织加100-200ul的比例加入裂解液(如裂解不完全,
可以适当增加用量;如需要的蛋白样品浓度较高,可以适当减少用量)。
用手握式电动组织细胞匀浆器匀浆约1min或直至充分裂解。
10,000-14,000g离心3-5min,取上清,即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
如果组织样品本身非常细小,如淋巴细胞,可直接加入裂解液,通过振荡(Vortex)以使样品裂解完全。
保存条件:
PMSF需-20℃保存,裂解液若经常使用,可于4℃保存至少三个月。若长期保存,建议置于-20℃,可保存一年。
裂解液中含有少量SDS,温度低会有沉淀析出,属于正常现象,使用时37℃加热溶解即可。
注意事项:
1、为获得实验效果,可适当分装使用,以尽量避免反复冻融。
2、PMSF应现用现加。
3、裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
4、蛋白酶抑制剂均有较高的毒性,为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
一旦直接接触,请立即用流水冲洗,再向医疗保健结构咨询。
常见问题分析:
细胞加入RIPA裂解液冰浴裂解后,离心,发现在液面附近有絮状物产生,是什么原因?
答:一般是因为细胞裂解不完全造成的。
改善方法:
(1)加大裂解液的量和裂解时间。
(2)加入裂解液后冰浴稍微超声处理,使其裂解完全。
一般来说,如果细胞裂解后变得澄清、不粘稠,这个时候再离心,就不会出现絮状物了。

 

 


 

 

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