RIPA 组织 / 细胞裂解液 规格；50ml 编号；WB-0072  

产品简介：RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。
RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。
RIPA裂解液（强）的主要成分为50mM Tris(pH7.4)，150mM NaCl，1%Triton X-100，
1% sodium deoxycholate，0.1%SDS，以及sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，
leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白降解。
用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用本公司生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。
由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
包装清单：

使用说明：
取出裂解液，待融化后颠倒混匀数次，适量分装冻存。
在使用前取出PMSF(100mM)，按比例加入（使其zui终浓度为1mM）混匀，立即使用。
1、培养细胞：
（1）贴壁细胞：去除培养液，用PBS、盐水或无血清培养液洗2-3遍
（如血清中的蛋白没有干扰，也可以不洗）。
按6孔板每孔加入100-200ul的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。
通常裂解液接触细胞数秒后细胞就会被裂解。
（2）悬浮细胞：收集培养细胞，离心去除培养液，用PBS、盐水或无血清培养液洗2-3遍
（如血清中的蛋白没有干扰，也可以不洗），
用手指把细胞用力弹散，按6孔板每孔细胞加入100-200ul的比例加入裂解液。
如果细胞数量较大，应按50-100万细胞/管分装或根据细胞数量按比例增加裂解液。
用手指轻弹管底以促进裂解液和细胞充分接触，裂解*时应无明显的细胞颗粒。
裂解物经10,000-14,000g离心3-5min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、
免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入100微升裂解液已经足够，
但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150微升或200微升。
2、组织样品
取Ep管，分别称重标记，把组织剪切成小块装入Ep管中，称重。
按每20mg组织加100-200ul的比例加入裂解液（如裂解不*，
可以适当增加用量；如需要的蛋白样品浓度较高，可以适当减少用量）。
用手握式电动组织细胞匀浆器匀浆约1min或直至充分裂解。
10,000-14,000g离心3-5min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
如果组织样品本身非常细小，如淋巴细胞，可直接加入裂解液，通过振荡（Vortex）以使样品裂解*。
保存条件：
PMSF需-20℃保存，裂解液若经常使用，可于4℃保存至少三个月。若长期保存，建议置于-20℃，可保存一年。
裂解液中含有少量SDS，温度低会有沉淀析出，属于正常现象，使用时37℃加热溶解即可。
注意事项：
1、为获得实验效果，可适当分装使用，以尽量避免反复冻融。
2、PMSF应现用现加。
3、裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
4、蛋白酶抑制剂均有较高的毒性，为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
一旦直接接触，请立即用流水冲洗，再向医疗保健结构咨询。
常见问题分析：
细胞加入RIPA裂解液冰浴裂解后，离心,发现在液面附近有絮状物产生，是什么原因？
答：一般是因为细胞裂解不*造成的。
改善方法：
（1）加大裂解液的量和裂解时间。
（2）加入裂解液后冰浴稍微超声处理，使其裂解*。
一般来说，如果细胞裂解后变得澄清、不粘稠，这个时候再离心，就不会出现絮状物了。