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T4 DNA聚合酶反应条件优化提高一步测序和无连接酶克隆的效率
点击次数:1814 发布时间:2017-11-20

     韩国科学家Mohammad Nazrul Islam等先前开发了一步测序和无连接酶克隆(SLIC)的方法,它简单、快速并且成本低。尽管SLIC方法通常作用效果很好,但是有时候它的克隆效率很低,可能是由于T4 DNA聚合酶室温处理2.5min时导致单链DNA区域形成稳定的二级结构。为了克服这个问题,通过检测较短T4 DNA聚合酶在很宽温度范围内(25-75)的持续处理时间(5s-2.5min),韩国科学家Mohammad Nazrul Islam等开发了一种改进的热调节SLIC方法。当插入的同源片段小于20bp,然后用T4 DNA聚合酶在50度处理30s,这样的克隆效率zui高。较高的温度下,这种较短的T4聚合酶帮助增加其两端插入强二级结构的DNA的克隆效率,增加短片段克隆的SLIC的效率。

原文:

Optimizing T4 DNA polymerase conditions enhances the efficiency of one-step sequence- and ligation-independent cloning. Mohammad Nazrul Islam, Kyeong Won Lee, Hyung-SoonYim et al. BioTechniques 63:125-130 (September 2017).

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