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什么是牛血清白蛋白,他的作用、用途和保存方法有哪些?
点击次数:509 发布时间:2021-07-12

一、定义:
牛血清白蛋白(BSA),是牛血清中的一种球蛋白,包含607个氨基酸残基,分子量为66.446KDa,等电点为4.7。牛血清白蛋白在生化实验中有广泛的应用。

二、主要成分
1、蛋白质
是牛血清中主要成份。除包括可携带金属离子、脂肪酸和自身是激素类蛋白外主要还有白蛋白,球蛋白。纤维粘连素细胞促进细胞附着;α2巨球蛋白抑制胰蛋白酶的作用;胎牛血清中含胎球蛋白促细胞附着;转铁蛋白能结合铁离子,减少其毒性和被细胞利用。
2、多肽
血小板促生长因子能促细胞分裂,是多肽家庭的主要成员之一,是主要的促细胞增殖因子;成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、神经细胞生长因子等,血清中含量虽很少,但对细胞生长也有一定作用。
3、激素
激素对细胞的作用是多方面的。
胰岛素:促进细胞摄取葡萄糖和氨基酸,与促细胞分裂有关。
类胰岛素生长因子:能与细胞表达的胰岛素受体结合,从而有胰岛素同样的作用。
促生长激素:促细胞增殖效应。

4、其他成份
氨基酸、葡萄糖、酮酸等对多种营养成分的合成培养基意义不大。与蛋白相结合状态的微量元素对细胞培养有意义。

三、作用
BSA一般做为稳定剂被用于限制酶或者修饰酶的保存溶液和反应液中,因为有些酶在低浓度下不稳定或活性低。加入BSA后,它可能起到保护载体作用,不少酶类添加 BSA后能使其活性大幅度提高。不需要加BSA的酶加入BSA一般不会受到什么影响。对多数底物DNA而言,BSA可以使酶切更完全,并可实现重复切割。在37,酶切反应超过1h时,BSA可以使酶更加稳定,因为在不含BSA的反应缓冲液中,许多限制性内切酶在37下只能存活10"20min甚至更短的时间。而BSA可以结合缓冲液或底物DNA中抑制限制性内切酶活性的金属离子和其它化学物质。

缓冲液
1.BSA是酶的稳定剂,防止酶的分解和非特异性吸附;
2.BSA能减轻有些酶的变性,能减轻有些不利环境因素如加热,表面张力及化学因素引起的变性的,可能是因为它结构中有17个二硫键,和一个巯基,巯基的化学反应很活泼,二硫键有抗氧化还原的作用,因此可与多种阳离子,阴离子和小分子结合;
3.BSA能防止酶吸附到管壁而损失。

四、用途
1、用于生化研究、遗传工程和医药研究
2、用作医药保健食品、调味品
3、维持渗透压、pH缓冲、载体作用
4、在PCR体系中有助于Taq酶的稳定性及活性,可以提高PCR的效率

五、储存方法
10克加100毫升水进行溶解,或用 PBS溶解也可,视用途而决定。然后分装成小支。若不使用防腐剂可贮存在零下2030摄氏度的恒温柜中,若使用防腐剂则可贮存在零上4摄氏度的环境下。一般可存放数月不变质。防腐剂可能对牛血清白蛋白的效果造成影响,应慎用。

六、应用
牛血清白蛋白(BSA)在生化实验中有广泛的应用, 例如在WB实验中加入BSA, 通过提高溶液中蛋白质的浓度,对酶起保护作用。防止酶的分解和非特异性吸附,能减轻有些酶的变性,减轻不利环境因素如加热,表面张力及化学因素引起的变性的。

1、测定蛋白浓度
501配置BCA工作液。10ulC液(蛋白标准)+90ulPBS液稀释成0.5mg/ml的蛋白标准液。再分别以01248121620ul将蛋白标准液加入96孔板的第1~8标准孔中,在其他样品孔中加入10ul待测样品。分别加PBS定容至20ul。各孔中加入200ulBCA工作液,室温放置2小时。用酶标仪测定蛋白浓度:测定A562,依标准曲线算出蛋白浓度。

2SDS-PAGE电泳
1)制 : 按比例配制分离胶,缓缓地摇动溶液,使激活剂混合均匀,将凝胶溶液平缓地注入两层玻璃极中,再在液面上小心注入一层水,以阻止氧气进入凝胶溶液中,静置40min。同前按比例配制浓缩胶,但混匀溶液时不要过于剧烈以免引入过多地氧气。吸去不连续系统中下层分离胶上的水分,连续平稳的注入凝胶溶液,然后小心插入梳子并注意不得在齿尖留有气泡,静制60min以上以保证完全聚合。
2)预电泳: 将聚合好的凝胶安置于电泳槽中,小心拔去梳子,加入电泳缓冲液后低电压10-20V的预电泳20-30min。(目的是清除凝胶内的杂质, 疏通凝胶孔径以保证电泳过程中电泳的畅通)。
3)样品准备:首先计算上样体积,然后按样品:上样buffer=41的比例加入上样bufer混匀,沸水10分钟,冰上5分钟。
4)加 样: 预电泳后依次加入标准品(Marker)和待分析样品。(加样时间要尽量短,以免样品扩散,可在未加样的孔中加入等量的样品缓冲液避免边缘效应。每个泳道加5ul
5)电 泳: 加样完毕,选择80V恒压进行电泳,电泳直至溴酚蓝染料前沿到达两胶交界处(一般约20分钟),更换至100V恒压电泳,电泳直至溴酚蓝染料前沿下至凝胶末端处,即停止电泳(一般约为1小时20分钟)。

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