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Folin——酚试剂的配置
点击次数:4829 发布时间:2015-08-17

. Folin——酚试剂甲

溶液1):1:2g无水碳酸钠溶于100m10.2mol/l氢氧化钠中(以配制成 5X),用时稀释5倍。

溶液2:0.5g 五水硫酸铜溶于100ml1%酒石酸钾钠(或酒石酸钠)溶液。将稀释后

的溶液 1 与溶液 2 ,以50:1的比例混合。混合后即为Folin——酚试剂甲,此试剂只

能用一天,过期失效。

.Folin——酚试剂乙

原溶液度为2moL/L使用前需稀释一倍,用多少稀释多少,使其zui后浓度为 1moL/L,

此为Folin——酚试剂乙应用液。Folin——酚试剂乙原液平时应封闭贮存于 4°C冰箱

中避光

保存。

.操作方法

标准曲线的制作:取14支试管分成两组,按下表顺序加入试剂,混匀,于室温

放置10分钟。再加入0.5毫升试剂乙,立即摇匀,在室温放置 30 分钟,然后于

500nm 处比色。测定光密度值。取两种测定的平均值,以蛋白质浓度为横座标,

光密度值为

纵座标,绘制标准曲线为

定量的依据。

试剂/管号

0

1

2

3

4

5

6

BSA/ml(250ug/ml

0

0.1

0.2

0.4

0.6

0.8

1.0

蒸馏水/ml

1.0

0.9

0.8

0.6

0.4

0.2

0

试剂甲/ml

5

5

5

5

5

5

5

试剂乙/ml

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

0.5

样品测定:

1)取毫升样品溶液(约含 20-250微克多肽或蛋白质)加入 5 毫升试剂甲混匀,

于温室放置 10 分钟。

2)加入0.5毫升试剂乙(Folin——酚),立即摇匀,于室温保温 30 分钟:然后

500nm处比色,以 1 毫升水代替样品作空白对照。测定后,可以从标准曲线中查出

未知样品浓度。若用 0.5 厘米光程的比色杯进行比色,可按下面方法进行操作:取

0.2 毫升样品溶液(约 5-100微克多肽或蛋白质),加入 1 毫升试剂甲(可选用

0.3-0.5 厘米直径的小试管)混匀,10分钟以后,再加入 0.1 毫升试剂乙,立刻混

匀,30 分钟后比色一般来说,若多肽或白质浓度在 2-25 微克,则采用波长

755nm,而 25 微克以上则采用 500nm 比色为宜。


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